Kuidas baktereid tuvastada?

Sisu

• etappidel
• 1. meetod Tuvastage bakter grammi järgi
• 2. meetod Tehke Ziehl-Neelseni värvimistesti
• 3. meetod Uurige bakterite käitumist ja välimust
• 4. meetod tõlgendage kõiki tulemusi

Selles artiklis: Bakteri tuvastamine grammi järgi värvimise teel. Teostage Ziehl-Neelseni värvimistesti. Uurige bakterite käitumist ja välimustKõigi tulemuste tõlgendamine43

Bakterite tuvastamine on keeruline ülesanne. Üks põhjusi on see, et hinnanguliselt on maailmas 10 000–1 miljardit bakteriliiki! Bakterite õige tuvastamine on väga oluline, eriti meditsiini valdkonnas, kus haiguse õige ravi sõltub suuresti probleemi põhjustavate mikroobide tüübist. Enamikul juhtudel tehakse identifitseerimine elimineerimise alusel. Bakteri tuvastamiseks peate tegema värvimisteste, analüüsima selle välimust ja jälgima, kuidas see reageerib erinevatele tingimustele hästi. Kui vajate kiiret tulemust, võtke laborisse saatmiseks DNA-proov.

etappidel

1. meetod Tuvastage bakter grammi järgi

1. määrama kui bakterid on grampositiivsed või negatiivsed. Gram-värvimine on meetod bakterite jagamiseks kahe kõige tavalisema tüübi vahel: grampositiivne ja gramnegatiivne. Neil endistel on paks rakusein, mis koosneb peptidoglükaanist nimega polümeer, millel on kõige parem värvumine gramnegatiivsete bakterite õhukeste seintena.
   • Mõned levinumad grampositiivsete bakterite tüübid on streptokokid, stafülokokid, mikrokokid (või mikrokokid) ja listeria.
   • Siin on mõned gramnegatiivsete bakterite tavalised näited: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium ja Campylobacter.
2. Võtke sobivaid kaitsemeetmeid. Bakterid ja keemilised elemendid, mida katse ajal kasutate, ohustavad teie tervist. Värvimistesti tegemisel kandke kaitseprille, ühekordselt kasutatavaid nitriilkindaid ja laboriülikonda. Kui olete lõpetanud, pange kindad ja kõik muud saastunud materjalid spetsiaalsesse kotti. Pidage meeles, et saastunud toodete kotist vabanemiseks järgige labori protseduure.
3. Pange vaatletav proov klaasklaasile. Testi alustamiseks asetage tilk või bakteriproov steriilsele slaidile. Seejärel libistage tera kolm korda süüdatud Bunseni põleti kohal, et proov fikseeruda ja reagentide loputamisel või lisamisel plaadilt välja tulla.
4. Lisage terale 5 tilka lillat kristalli. Proovile valatakse viis tilka kristallvioletset lahust. Oodake minut, kuni proov kristallvioletti imendub.
   • Hoidke tera riiete tihvtidega paigal, nii et te ei määri käsi.
5. Plekki eemaldamiseks peske tera hoolikalt. Kasutage kraani või pigistatavat pudelit ja laske vett kuni viis sekundit väga aeglaselt voolata, et eemaldada tindijäägid, mis pole proovi külge kleepunud.
6. Valage slaidile viis tilka grammi dioodi peitsi. See on dioodist, naatriumvesinikkarbonaadist ja kaaliumdioksiidist koosnev lahus, mis põhjustab kristallvioleti sulamist bakterite rakuseintega. Proovile valatakse viis tilka lahust ja jäetakse minutiks seisma.
7. Pese proovi alkoholi või piimhappega. Alkohol ja latsetoon on pleegitusained ja need välistavad bakteriraku seinte värvumise, kui need on gram-negatiivsed. Valage proovile paar tilka valgendit ja laske sellel töötada kuni kolm sekundit. Pärast seda proovige neid pleegitusaineid eemaldada loputada ettevaatlikult viis sekundit veega.
   • Kui lubate pleegitajal pikka aega töötada, võib see põhjustada grampositiivsete bakterite värvimise kadumist, mille tulemuseks on valenegatiiv.
8. Tehke kontrastaine test safraniiniga. Safraniin on punane värvaine, mis vastandub kristallvioletile, värvides sellega baktereid, mida lilla värvimine ei mõjuta. Proovile valatakse umbes viis tilka safraniini ja jäetakse minutiks seisma. Pärast seda proovige loputada viis sekundit ettevaatlikult veega.
9. Kujutlege oma proovi 1000x suurendusega. Bakterid muutuvad lillaks või lillaks, kui see on grampositiivne, või roosaks, kui see on gram-negatiivne safraniini tõttu.

2. meetod Tehke Ziehl-Neelseni värvimistesti

1. Kasutage seda tehnikat happekiirete bakterite tuvastamiseks. Need liigid sisaldavad suuremas koguses lipiide, muutes need vastupidavamaks Gram-värvimisel kasutatavate värvainete suhtes. Happekindlad bakterid kuuluvad perekonda Mycobacterium, kuhu kuulub ka tuberkuloosi (M. tuberculosis) eest vastutav bakter. Happekindla bakteri värvimiseks peate kasutama punast värvi, mida nimetatakse karboolseks fuksiiniks, mis on vastupidav happeliste või väävelhappe lahustega loputamisele.
2. Võtke sobivaid kaitsemeetmeid. Ziehl-Neelseni värvimisel kasutatavad keemilised ja bioloogilised materjalid võivad olla ohtlikud. Lisaks peate kasutama ka soojusallikaid, näiteks Bunseni otsikut, elektrikerist või alkoholilampi. Testi tegemiseks järgige allpool toodud juhiseid.
   • Pange kaitseprillid, nitriilkindad ja labori kate.
   • Ärge hingake sisse värvainete ja pleegitajate aurusid ning ärge laske tilkadel pritsida silmi ega nahka. Hoidke mahuteid kapoti all lahti.
   • Tera soojendamisel olge väga ettevaatlik. Enamik kasutatud kemikaale on tuleohtlikud. Samuti võib liumägedel või muudel seadmetel olla tuleohtlike ainete jälgi.
3. Valmistage tera ette. Jaota ringikujuliste liikumistega steriilse klaasi keskele ühtlaselt väike kogus bakteriproovi. Teie proov peaks olema umbes 10 mm kuni 20 mm.
4. Kuivatage tera. Asetage tera kuivatuskonstruktsioonile nii, et proov oleks ülespoole. Lase 30 sekundit loomulikult kuivada. Ärge proovige tera lapiga kuivatada.
5. Kinnitage proov kuumusega. Kui proov on üleval, libistage tera kaks või kolm korda üle põlenud Bunseni põleti. Saate tera asetada ka elektriküttekehale, seades temperatuuri vähemalt kaheks tunniks vahemikku 65 ° C kuni 75 ° C. Ärge proovi keeta ega põletada.
6. Lisage terale karboolne fuksiin. Valage slaidile mitu tilka seda lahust. Vala piisavalt, et proov oleks täielikult kaetud.
7. Kuumuta tera värvi kinnitamiseks. Soojendage objektiklaasi ettevaatlikult Bunseni põleti või alkohollambi kohal, suunates proovi ülespoole, või asetage see elektrikerisele. Kuumutage tera temperatuurini 60 ° C või seni, kuni see hakkab aurustuma. Lase värvil toimida viis minutit.
   • Kui kasutate elektrikerist, lülitage see sisse temperatuuril 60 ° C. Kui valite alkoholilampi või Bunseni põleti, peaksite eeldama, et näete suitsu.
   • Kui tera hoitakse soovitud temperatuuril viis minutit, soojendage seda vahelduvalt.
   • Ärge proovi keetke, põletage ega kuivatage.
8. Loputage tera külma veega. Lase viis minutit jahtuda ja loputa mõni sekund õrnalt puhta veega. Proovile kleepunud värviplekkide eemaldamiseks kasutage kraanivett või pigistatavat pudelit.
9. Valage proovile happeline alkohol või väävelhape. Proovi katmiseks kasutage 3 mahuprotsenti alkoholi või 20 mahuprotsenti väävelhapet. Laske happel toimida, kuni värv tuhmub ja saavutab väga heleroosa varju. Protsess võtab tavaliselt umbes kümme minutit.
10. Tera loputamiseks kasutage puhast vett. Peske tera õrnalt kraani all või pigistatava pudeli abil. Eemaldage kõik happe- ja värvijäägid hästi.
11. Lisage kontrastaine. Kui klapp on loputatud, valage värviga malahhiidroheline või metüleensinine. Need kaks lahendust loovad sinaka või roheka tausta, millel punane värvaine esile kerkib, aga ka muud bioloogilised materjalid, näiteks inimrakud ja happekindlad bakterid. Laske ainetel töötada üks kuni kaks minutit.
12. Loputage ja kuivatage tera. Loputage hoolikalt veega, et eemaldada liigne kontrastsus. Kui olete lõpetanud, kuivatage tera tagakülg kuiva lapiga ja laske sellel loomulikult alusel kuivada.
13. Kujutlege oma proovi 1000x suurendusega. Happekindlad bakterid muutuvad punaseks või tumeroosaks. Muud bakterid, mittebakteriaalsed rakud ja tera põhi muutuvad roheliseks või siniseks.

3. meetod Uurige bakterite käitumist ja välimust

1. Analüüsige bakterite kuju. Pärast värvimistesti tegemist, et teha kindlaks, kas bakterid on grampositiivsed, gramnegatiivsed või happekindlad, on aeg liigid täpsemalt kindlaks teha. Esiteks analüüsige slaidil olevate bakterite kuju. Kolm kõige tavalisemat vormi on cocci (sfääriline), spiraal ja bacilli (varda kuju).
   • Nendel vormidel on mitu varianti. Ümara kujuga bakterid (coccus) võivad näiteks ilmuda paarikaupa (diplokokid), ahelatena, hunnikutes või nelja rühmaga (tetrad).
2. Uurige välja, kas bakterid on aeroobsed või anaeroobsed. Võtke kaks bakteriproovi ja looge kaks eraldi kultuuri. Kuu peab olema anaeroobne (kasvanud ilma hapnikuta), teine ​​aga aeroobne (kasvatatud hapnikuga). Enne kasvu jälgimist hoidke anaeroobset kultuuri temperatuuril 35 ° C hapnikuvabas kohas vähemalt 48 tundi.
   • Kui bakterid kasvavad keskkonnas, kus puudub hapnik, kuid mitte kokkupuutel hapnikuga, tähendab see, et nad on anaeroobsed.
   • Kuigi nad arenevad hapnikuga küllastunud keskkonnas, kuid mitte hapniku puudumisel, on nad aeroobsed.
   • Kui nad arenevad mõlemas keskkonnas, räägime fakultatiivsetest anaeroobsetest bakteritest.
3. Tehke liikuvuse test. Bakter on liikuv, kui see suudab liikuda üksinda koos ühe või mitme helvestega. Motiilsusaste on teatud bakteriliikide tuvastamisel väga oluline. Motiilsust on mitut tüüpi, kuid kindlaim ja loetavam viis on pooltahke keskkond.
4. Looge liikuvustesti kultuur. Valmistage ette kultuuripuljongis bakterikultuur. Valitud puljongi valmistamiseks järgige allpool toodud juhiseid.
5. Motiilsustestide jaoks inokuleeritakse kultuur pooltahkes agaris. Katke osa puljongikultuurist steriilse nakatamisnõelaga. Istutage nõel ettevaatlikult testimiseks ettevalmistatud pooltahkesse dagar-torusse, näiteks TTC lagar. Nõel peab läbima 2/3 agarist.
   • Kui olete lõpetanud, eemaldage nõel ettevaatlikult, jälgides, et te ei ületaks nakatamistsooni piire.
   • Inkubeerige tuubi 48 tundi temperatuuril 30 ° C.
6. Loe testi tulemust. Motiilsustesti agar muutub kokkupuutel bakteritega punaseks. Kui need on liikuvad, levib see punane või roosakas varjund kogu aine ulatuses. Muidu piirdub värvimine ainult süstekohaga.

4. meetod tõlgendage kõiki tulemusi

1. Koguge oma kommentaare. Bakterite liikide tundmiseks peate koguma teavet kultuuridelt, värvikatsete ja vormide vaatlemise kohta. Kui uurite patsiendi proove, võivad nende sümptomid aidata leida ka sobivat bakteritüüpi.
   • Näiteks kui testid näitavad, et bakterid on gramnegatiivsed, anaeroobsed, mittemotiilsed ja kui märkate patsiendil selliseid sümptomeid nagu kõhuvalu, iiveldus ja oksendamine, siis on tõenäoline, et patsient põeb Bacteroides'i nakkust. fragilis.
2. Tutvuge andmebaasiga. Maailmas on tuhandeid bakteriliike. Kõike on südamest võimatu teada. Tõenäoliselt peate uurima kliinilise mikrobioloogia raamatut või veebipõhist andmebaasi, et võrrelda katsetulemusi bakteriliikide teabega.
   • Bakterite tuvastamiseks on olemas suurepärased veebiressursid, kuid enamik neist andmebaasidest on saadaval inglise keeles, sealhulgas Patricbrc.org ja GlobalRPh. INRA rahvusvahelise mikroobide ressursikeskuse veebisaidilt leiate siiski kasulikku teavet.
3. Tehke geneetiline test, et teada saada bakterite täpset liiki. Mõnel juhul peate võib-olla tuvastama bakteriliigid. Kiireim ja lihtsaim meetod on teha DNA-test. DNA-testid on kasulikud ka traditsiooniliste värvimis- ja kultuurivormide suhtes resistentsete bakterite tuvastamiseks. Tänapäeval on mikroorganismide DNA-testid väga kiired ja valmis saavad olla vähem kui kahe tunniga.
   • Kui teil pole juurdepääsu laboratooriumile, kus teostatakse mikroorganismide geneetilist järjestamist, saatke bakteriproov spetsialiseeritud asutusele.